Sabiex tiġi evitata l-kontaminazzjoni inkroċjata waqt it-tħaddim, ir-rekwiżiti ewlenin għad-disinn, il-kostruzzjoni u l-ġestjoni tat-tħaddim tagħhom huma:
1. Id-disinn u l-kostruzzjoni tal-laboratorju, sistema ta 'xogħol bla periklu jew proċeduri operattivi standard ta' sikurezza għandhom jissodisfaw ir-rekwiżiti tal-kwotazzjoni&attwali; Rekwiżiti Ġenerali għall-Laboratorju tal-Bijosikurezza" GB19489.
2. Il-PCR huwa maqsum f'erba 'żoni funzjonali skond il-passi ta' ħidma, jiġifieri l-ħażna tar-reaġent u ż-żona ta 'preparazzjoni, il-kampjun taż-żona ta' preparazzjoni, iż-żona ta 'amplifikazzjoni, u l-erja ta' analiżi tal-prodott ta 'amplifikazzjoni. Jekk strument PCR fluworexxenti f'ħin reali jkun mgħammar, l-amplifikazzjoni u l-analiżi tal-prodott jistgħu jiġu kkombinati. Kull żona funzjonali għandha tkun immarkata b'mod ċar, u t-tagħmir u l-oġġetti f'żoni funzjonali differenti m'għandhomx jitħalltu.
Id-direzzjoni tal-fluss ta 'l-arja tal-laboratorju tal-PCR tista' titwettaq skond iż-żona ta 'preparazzjoni tal-ħażna tar-reaġent → żona ta' preparazzjoni tal-kampjun → żona ta 'amplifikazzjoni → żona ta' analiżi tal-prodott amplifikata biex tevita li l-prodotti amplifikati jidħlu fiż-żona pre-amplifikata flimkien ma 'fluss ta' arja. Jista 'jitwettaq bil-mod li tonqos il-pressjoni ta' l-arja mill-ħażna tar-reaġent u ż-żona ta 'preparazzjoni → żona ta' preparazzjoni tal-kampjun → żona ta 'amplifikazzjoni → żona ta' analiżi tal-prodott ta 'amplifikazzjoni. Jista 'jinkiseb billi jiġu installati fannijiet ta' l-egżost, apparat ta 'l-egżost bi pressjoni negattiva jew metodi fattibbli oħra.
3. Id-dħul f'kull żona tax-xogħol għandu jsegwi strettament direzzjoni waħda, jiġifieri, ħażna tar-reaġenti u żona ta 'preparazzjoni → żona ta' preparazzjoni tal-kampjun → żona ta 'amplifikazzjoni → żona ta' analiżi tal-prodott ta 'amplifikazzjoni. Żoni ta 'xogħol differenti (bħal kuluri differenti) għandhom jintużaw. Il-ħaddiema m'għandhomx jieħdu ħwejjeġ tax-xogħol meta jitilqu minn kull żona tax-xogħol.
4. It-tindif tal-laboratorju għandu jitwettaq fid-direzzjoni tal-ħażna tar-reaġent u taż-żona tal-preparazzjoni → żona tal-preparazzjoni tal-kampjun → żona tal-amplifikazzjoni → żona tal-analiżi tal-prodott amplifikata. Żoni sperimentali differenti għandu jkollhom l-apparat tat-tindif tagħhom stess biex tiġi evitata kontaminazzjoni inkroċjata.
5. Wara li x-xogħol ikun intemm, iż-żona tax-xogħol għandha titnaddaf immedjatament. Il-wiċċ tal-bank tal-laboratorju fiż-żona tax-xogħol għandu jkun kapaċi jiflaħ għall-effetti ta ’diżinfezzjoni u tindif ta’ kimiċi bħall-ipoklorit tas-sodju. L-irradjazzjoni ultravjola fuq il-wiċċ tal-bank tal-laboratorju għandha tkun konvenjenti u effettiva. Peress li d-distanza u l-enerġija ta 'l-irradjazzjoni ultravjola huma kritiċi ħafna għall-effett ta' dekontaminazzjoni, tista 'tintuża lampa ultravjola mobbli (wavelength ta' 254nm), u wara li x-xogħol jitlesta, jista 'jiġi aġġustat biex irradja fi żmien 60-90cm fuq it-tabella sperimentali . Peress li l-prodott amplifikat huwa biss ftit mijiet jew għexieren ta 'pari ta' bażi (bp), mhuwiex sensittiv għal ħsara UV, għalhekk il-framment amplifikat irradjat bl-UV għandu jkun irradjat għal żmien itwal, preferibbilment matul il-lejl.
Il-funzjonijiet tal-ħażna u l-preparazzjoni tar-reaġent huma: il-preparazzjoni tar-reaġenti tal-ħażna, id-distribuzzjoni tar-reaġenti u l-preparazzjoni tat-taħlita tar-reazzjoni tal-amplifikazzjoni, kif ukoll il-ħażna u l-preparazzjoni ta 'konsumibbli bħalma huma t-tubi taċ-ċentrifuga u l-ponot. Materjali bħal reaġenti tal-ħażna u oġġetti li jintużaw għall-preparazzjoni tal-kampjun għandhom ikunu direttament trasportati lejn il-ħażna tar-reaġent u ż-żona ta 'preparazzjoni, u ma jistgħux jgħaddu mill-erja ta' skoperta ta 'amplifikazzjoni. Il-materjali tal-kontroll pożittiv u l-materjali tal-kontroll tal-kwalità fil-kit m'għandhomx jinħażnu f'dan il-qasam, iżda għandhom jinħażnu f'dan il-qasam. Żona tal-ipproċessar tal-kampjuni.
Il-funzjoni taż-żona tal-preparazzjoni tal-kampjun hija: estrazzjoni tal-aċidu nuklejku (RNA, DNA), ħażna u żieda fit-tubu tar-reazzjoni tal-amplifikazzjoni. Għal operazzjonijiet li jinvolvu kampjuni kliniċi, ir-rekwiżiti għal tagħmir protettiv, protezzjoni personali, u speċifikazzjonijiet operattivi għal laboratorji sekondarji tal-bijosikurezza għandhom ikunu sodisfatti. Peress li l-kontaminazzjoni mill-aerosols tista 'sseħħ waqt it-taħlit tal-kampjuni u l-purifikazzjoni tal-aċidu nuklejku, jistgħu jiġu stabbiliti kondizzjonijiet pożittivi ta' pressjoni f'dan il-qasam sabiex tiġi evitata l-kontaminazzjoni ta 'l-ajrusol minn żoni ġirien. Sabiex tiġi evitata kontaminazzjoni inkroċjata bejn il-kampjuni, wara li jiżdied l-aċidu nuklejiku li għandu jiġi ttestjat, it-tubu tar-reazzjoni li fih it-taħlita tar-reazzjoni għandu jkun miksi. Għal materjali potenzjalment infettivi, l-għatu għandu jinfetaħ fil-kabinett tas-sigurtà bijoloġika, u għandu jkun hemm proċeduri ċari għall-immaniġġjar tal-kampjuni u l-inattivazzjoni.
Il-funzjoni taż-żona ta 'amplifikazzjoni hija: sintesi tad-DNA, amplifikazzjoni tad-DNA u skoperta. Sabiex jiġi evitat it-tniġġis ikkawżat mill-ajrusols, il-mixi fiż-żona għandu jiġi mminimizzat. Għandu jiġi nnutat li t-tubi ta 'reazzjoni kollha ttestjati m'għandhomx jinfetħu f'dan il-qasam.
Il-funzjoni taż-żona ta 'analiżi tal-prodott amplifikata hija: analiżi u determinazzjoni ulterjuri ta' frammenti amplifikati, bħall-ibridizzazzjoni, l-elettroforesi tad-diġestjoni enzimika, analiżi ta 'likwidu ta' prestazzjoni għolja, sekwenzar, eċċ. Prodotti ta 'amplifikazzjoni ta' aċidu nuklejiku għandhom metodi ta 'analiżi varji, bħal metodi ta' ibridi ta 'sonda fuq membrani jew fuq microplates jew ċipep (tikketta radjonuklida jew tikkettjar ta 'nuklejju mhux radjuattiv), elettroforeżi ġelata diretta jew diġerita, elettroforeżi tal-ġel Polyacrylamide, trasferiment tan-Nofsinhar, metodi ta' sekwenzar ta 'aċidu nuklejku, spettrometrija tal-massa, eċċ.
Iż-żona ta 'analiżi tal-prodott ta' amplifikazzjoni hija s-sors ewlieni ta 'kontaminazzjoni ta' prodott ta 'amplifikazzjoni fil-laboratorju tal-PCR, għalhekk għandha tingħata attenzjoni biex tevita li ġġorr il-prodott ta' amplifikazzjoni permezz tal-oġġetti u l-ħwejjeġ tax-xogħol f'dan il-qasam. Meta tuża l-metodu PCR-ELISA biex tiskopri prodotti amplifikati, għandha tintuża l-washer tal-pjanċa biex taħsel il-pjanċi, u l-likwidu mormi għandu jinġabar f'1 mol / L HCl, u ma jistax jitferra fil-laboratorju, iżda għandu jintrema 'l bogħod mil-laboratorju tal-PCR. Waqqa '. Il-ponta użata għandha wkoll tkun mgħaddsa f'1 mol / L HCl u mbagħad titqiegħed f'borża taż-żibel għar-rimi skond il-proċeduri, bħal inċinerazzjoni. Peress li din iż-żona tista 'tuża ċerti mutazzjonijiet ġenetiċi u sustanzi tossiċi bħal bromur tal-etidju, akrilamide, formaldehyde jew radjonuklidi, eċċ., Il-protezzjoni tas-sigurtà tal-esperimentaturi għandha tingħata attenzjoni.